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Home > 肌酐酶 > 肌酐酶
  • 产品名 : 肌酐酶
  • CAS: 9025-13-2
  • 品牌: 力东
  • 规格: 10ku 100ku 1000ku 10000ku
  • 市场价(¥) : 47 303 2800 23333

技术指标

外观:白色或微黄色无定型冻干粉末;蛋白纯度:≥90%;比活性:≥150 U/mg酶粉;过氧化氢酶:≤0.1%;蛋白酶:≤0.001%;肌酸酶:≤0.001%;ATP酶:≤0.001%;

酶学性质

来源:微生物;分类:EC 3.5.2.10;分子量:29 kDa(SDS-PAGE);等电点:5.3;Km值:5.0×10-2 M(Creatinine),8.0×10-2 M(Creatine);抑制剂:Hg2+,Cu2+,Fe3+;最适pH:7.0-8.0;最适温度:65℃;pH稳定性:pH 5.5-10.0(25℃,16 h);热稳定性:65℃以下稳定(pH 8.0,30 min);稳定性:-25~-15℃静置保存12个月保持90%以上活性;保护剂:糖类以及BSA。

用途:水解肌酐,用于酶法肌酐试剂的研发和大量配制。

活性测定方法

原理:Creatinine+H2O Creatinine amidohydrolase Creatine

酶活定义:单位酶活定义为在下述条件下,每分钟催化反应生成1μmol肌酸所需的酶量。

试剂准备

试剂I:0.3 M磷酸钾缓冲液,pH 6.5。

试剂II:0.1 M肌酐溶液(1.13 g肌酐溶于100mL UP水中)。

试剂III:4%Na2CO3溶液(4.0 g Na2CO3溶于100mL UP水中)。

试剂IV:2%α-萘酚溶液(2.0 gα-萘酚溶于100 mL 99.5%乙醇中)。

试剂V:1.2 g NaOH和3.2 g Na2CO3溶于双蒸水中,定容至100 mL。

试剂VI:0.05%二乙酰溶液(0.05 mL二乙酰加水定容至100 mL)。

酶稀释液:5 mM Tris-HCl pH 8.0

操作步骤

1.在5 mL离心管中加入0.1 mL试剂I,0.8mL试剂II。

2.37℃水浴5 min。

3.加入0.1 mL待测样品,37℃孵育10 min。

4.加入2.0 mL试剂III终止反应,取出置于冰上。

5.在新的5 mL离心管中按顺序加入如下试剂:第4步的溶液80μL;双蒸水720μL;试剂IV 400μL;试剂V 400μL;试剂VI 400μL

6.25℃静置1 h后,加入2 mL双蒸水稀释。

7.用分光光度计在525 nm检测吸光度。

*用酶稀释液替代酶液,其它步骤相同,所得溶液吸光度为空白吸光度(ΔAb)ΔA=ΔAs-ΔAb

活力计算

Vt:反应液总体积(1.0 mL);

Vs:酶液体积(0.1 mL);

t:反应时间(10 min);

df:稀释倍数;

C:酶浓度(mg/mL);

1.0:光路长度(cm);

0.0704:标准反应条件下,生色基团在525nm处毫摩尔吸光系数(cm2/μmol)。


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