技术指标

外观：白色无定型冻干粉末；蛋白纯度：≥90%；比活性：≥6 U/mg酶粉；过氧化氢酶：≤0.03%；肌酐酶：≤0.01%；肌氨酸氧化酶：≤0.01%；NADH氧化酶：≤0.01%

酶学性质

来源：微生物；分类：EC 3.5.3.3；分子量：48 kDa(SDS-PAGE)；等电点：4.6；Km值：1.7×10-2 M(Creatine)；抑制剂：Ag+，Cu2+，Hg2+；最适：pH 7.5；最适温度：45-50℃；pH稳定性4.5-10.0(25℃,16 h)；热稳定性50℃以下稳定(pH 7.5,30 min)；稳定性：-25～-15℃静置保存12个月保持90%以上活性；保护剂：EDTA及糖类物质

用途：水解肌酸，用于酶法肌酐试剂的研发和大量配制。

尿素（Urea）和DAB（ρ-dimethylaminobenzaldenhyde）反应形成的黄色染料的量可通过分光光度计在435 nm检测。

酶活定义：单位酶活定义为在下述条件下，每分钟催化反应生成1μmol肌酸完全转化为肌氨酸所需的酶量。

试剂准备

试剂I：0.1 M肌酸溶液。

试剂II：将2.0 g DAB溶解在100 mL二甲亚砜中，并加入15 mL浓盐酸。

酶稀释液：50 mM PBS，pH 7.5,样品用酶稀释液将酶稀释至2.0-3.0 U/mL。

操作步骤

1.取1 mL试剂I于5 mL EP管中，37℃预热5min。

2.加入0.1 mL酶液，混匀。

3.37℃水浴反应10 min后，加入2.0 mL试剂II终止反应，并在25℃放置20 min。

4.使用紫外分光光度计，测定反应液在435nm处吸光度值。

5.酶稀释液代替酶液作为空白对照。

活力计算

3.1：反应液总体积（mL）；

0.1：酶液体积（mL）；

10：反应时间（min）；

1.0：光路长度(cm)；

df：稀释倍数；

C：酶浓度(mg/mL)；

0.321：黄色染料在435 nm处毫摩尔吸光系数(cm2/μmol)。