外观:黄色无定型冻干粉末;蛋白纯度:≥90%;比活性:≥15 U/mg酶粉;过氧化氢酶:≤0.03%;肌酐酶:≤0.01%;肌酸酶:≤0.01%;ATP酶:≤0.005%

酶学性质

来源:微生物；分类:EC 1.5.3.1；分子量:45 kDa(SDS-PAGE)；等电点:5.3；Km值:5.6×10-3 M(Sarcosine)；抑制剂:SDS，Zn2+，Cd2+；最适pH:8.0；最适温度：50℃；pH稳定性：7.0-9.5(25℃,16 h)；热稳定性：50℃以下稳定(pH 7.5,30 min)；稳定性：-25～-15℃静置保存12个月保持90%以上活性。

用途：用于酶法肌酐试剂的研发和大量配制。

活性测定方法：

反应生成的醌亚胺（Quinoneimine dye）可在555 nm检测。

酶活定义：单位酶活定义为在下述条件下，每分钟催化生成1μmol H2O2所需的酶量。

试剂准备

试剂I：0.2 M Tris-HCl缓冲液，pH 8.0。

试剂II：1.0 M肌氨酸溶液（8.9 g肌氨酸溶解到100 mL UP水中）。

试剂III：1 kU/mL POD。

试剂IV：50 mM 4-AA溶液（1.016 g 4-AA溶于100 mL UP水）。

试剂V：50 mM TOOS溶液（1.657 g TOOS溶于100 mL UP水）。

酶稀释液：20mM Tris-HCl，pH 8.0，2mMEDTA。

按如下配制反应混合物：试剂I：5 mL；试剂II：10 mL；试剂III：0.25 mL；试剂IV：1.5 mL；试剂V：1.5 mL；双蒸水：31.75 mL；共50 mL，可用于50次反应。

操作步骤

1.向1 mL比色皿中加入1 mL反应混合物。

2.37℃温浴5 min。

3.向反应混合物中加入20μL待测酶液，混匀。

4.37℃反应，在555 nm检测样品1 min内的吸光度变化（ΔAs）

*用酶稀释液替代酶液，其它步骤相同，所得溶液吸光度为空白吸光度（ΔAb）ΔA=ΔAs-ΔAb

活力计算

1.020：反应液总体积（mL）；

0.020：酶液体积（mL）；

t：反应时间（1min）；

df：稀释倍数；

1/2：1摩尔过氧化氢生成1/2摩尔醌亚胺染料；

1.0：光路长度(cm)；

C：酶浓度(mg/mL)；

39.2：标准反应条件下，生色基团在555 nm处毫摩尔吸光系数(cm2/μmol)。