技术指标

外观：白色或淡黄色无定型冻干粉末蛋白纯度：≥90%;比活性：≥15 U/mg酶粉;过氧化氢酶：≤0.001%;尿酸酶：≤0.01%;己糖激酶：≤0.01%;ATP酶：≤0.005%

酶学性质

来源：微生物;分类：EC 2.7.1.30;分子量：55 kDa(SDS-PAGE);等电点：5.0;Km值：4.4×10-5 M(Glycerol),3.7×10-5

M(ATP);抑制剂：Ag+，Hg2+;最适：pH 7.5

用途：用于甘油三脂试剂的研发和大量配制。

酶活定义:单位酶活定义为在下述条件下，每分钟消耗1μmol甘油所需的酶量。

试剂准备

试剂I：0.3 M甘油（称取0.552 g甘油用纯水定容到20 mL）。

试剂II：纯水配制1 kU/mL POD。

试剂III：50 mM TOOS（1.477 g TOOS溶于100 mL UP水）。

试剂IV：50 mM 4-AA（1.016 g 4-AA溶于100 mL UP水）。

试剂V：20 U/mL甘油-3-磷酸氧化酶。

试剂VI：200 mM HEPES，含20 mM MgCl2和40 mM ATP（0.953 g HEPES，0.076 gMgCl2，0.44 g ATP，用10 mL水溶解，用NaOH调节pH至7.9，定容到20 mL）。

按如下配制反应混合物：

试剂VI：10 mL;试剂I:1.67 mL;试剂II:400μL;试剂III:3 mL;试剂IV:3 mL;试剂V:40 mL;双蒸水定容至100 mL

酶稀释液：20 mM,pH 7.5磷酸钾缓冲液。样品：用酶稀释液将酶稀释至0.2-0.4 U/mL。

操作步骤

1.在1 mL比色皿中加入1.0 mL反应混合物。

2.37℃温浴2 min。

3.加入0.02 mL待测样品，混匀。

4.用分光光度计在555 nm测定样品1 min内的吸光度变化ΔAs。

*用酶稀释液替代酶液，其它步骤相同，所得溶液吸光度为空白吸光度ΔAb。ΔA=ΔAs-ΔAb