技术指标

外观:白色或褐色无定形冻干粉末;蛋白纯度:≥90%;比活性:≥100 U/mg酶粉;葡萄糖氧化酶:≤0.01%;ATP酶:≤0.005%;过氧化氢酶:≤0.001%.

酶学性质

来源:微生物，鞘磷脂酶;分类:EC 3.1.4.12;分子量:36kDa(SDS-PAGE);等电点:8.6;Km值:2.4×10-5 M(Sphingomyelin);抑制剂:EDTA;最适pH:8.0;最适温度:45℃;pH稳定性:6.0-8.0(37℃,60min);热稳定性:40℃以下稳定(pH 7.5,30 min);稳定性:-25～-15℃静置保存12个月保持90%以上活性.

用途:用于小而低密度脂蛋白试剂的研发和大量配制。

酶活定义:单位酶活定义为在下述条件下，每分钟催化生成1μmol H2O2所需的酶量。

试剂准备

试剂I：0.1 M Tris-HCl，pH 8.0。

试剂II：10 mM MgCl2溶液。

试剂III：6 mM鞘磷脂溶液：称取45.8 mg的鞘磷脂，溶于10mL的无菌水中（含5%的Triton X-100）。

试剂IV：500 U/mL ALP溶液。

试剂V：120 U/mL CHO溶液。

试剂VI：1 kU/mL POD溶液，取1000 U

的POD溶于1mL的双蒸水。

试剂VII：50 mM 4–AA溶液。

试剂VIII：50 mM TOOS溶液。

试剂IX：1.0 M NaCl溶液。

试剂X：1%（W/V）Triton X-100溶液。

酶稀释液：10 mM pH 8.0 Tris-HCl，含0.1%Triton X-100和10 mM NaCl。

按如下配制反应混合物：试剂II:20mL;试剂III:10mL;试剂VI:0.5mL;试剂VII:3mL;试剂VIII:3 mL;试剂IX:1mL;试剂X:10mL;试剂I:定容至90mL样品：用酶稀释液将酶稀释至0.01U/mL。